引言

中国疾病预防控制中心营养与健康研究所、宁波大学食品与药学院中国食品科学与技术系、岛津企业管理(中国)有限公司联合研究，成功建立并验证了适用于血清中多种维生素D代谢物的高通量、高灵敏度SFC-MS/MS分析方法。

由于研究内容较多，故分为上、下两期来进行详细介绍。本期主要介绍内容为：研发背景、样品前处理、如何建立及优化SFC-MS方法等。

文章出处

Journal of Chromatography B 1120 (2019) 16-23

岛津Nexera UC全相系统之SFC-MS系统

本研究采用岛津超临界流体色谱仪Nexera UC、岛津三重四极杆液质联用仪LCMS-8060

超临界流体与改性剂配合使用，可在更大范围内满足不同极性化合物的检测需要；

低死体积和背压控制单元有效降低脉动，提高灵敏度；

溶剂使用量少且分析时间短，是一种绿色环保、有效的分析手段。

研究背景

维生素D（VD）作为一种脂溶性类固醇，在钙稳态和骨骼健康中起着重要作用，其主要以麦角钙化醇（VD2）和胆钙化醇（VD3）两种形式存在，多通过皮肤光照和食物或膳食补充剂来获取。VD进入体内参与生物调控，须在肝脏及肾脏内进行羟基化等复杂的代谢途径反应，因此其代谢产物结果是VD临床评价的主要挑战之一。

对于正常人血清或血浆中含有痕量1,25-(OH)2 VD2和1,25-(OH)2 VD3，分析时应考虑进一步改进定量限(如衍生化)。与LC-MS/MS法相比，采用超临界流体色谱仪（SFC）作为质谱前端，不仅降低了有机溶剂成本，还有具有更快分析速度及更高灵敏度。

样品前处理

采用3.5 mL真空血管采集空腹血样，凝固后1500 ×g离心30 min。上层血清移入无菌管，-80℃保存后用于分析。

建立及优化SFC-MS分析方法

1. SFC色谱柱的选择

考察了10种VD代谢物分别在Diol、CN、NH2、PFP和C18 5根色谱柱上的洗脱性能，并评价了不同固定相的选择性。如图1，除C18柱外，其他4根色谱柱上VD代谢产物色谱峰均为正常的洗脱顺序，保留时间随羟基数量的增加而增加。其中PFP柱能够分离所有VD代谢产物，分离效果较好，特别是25-OH VD2/VD3及其对映体的分离，并被选择用于进一步开发。

图1：A) Diol, B) CN, C) NH2, D) PFP, E) C18色谱柱上VD代谢产物的固定相化学结构和洗脱顺序。

1: 25-OH VD3和3-epi-25-OH VD3;
2: 25-OH VD2和3-epi-25-OH VD2;
3: VD3; 
4: VD2; 
5: 1,25-(OH)2 VD3; 
6: 1,25-(OH)2 VD2;  
7: 24，25-(OH)2 VD3; 
8: 24，25-(OH)2 VD2。